[VIP第1年] 指数:3
RNA组成结构：RNA和DNA一样，也是由各种核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链，但与DNA有一系列差异。1.在化学组成方面，RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶，这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少数DNA含有少量核糖，但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。2.RNA一级结构的概念虽与DNA相同.但其基本结构单位是核糖核苷酸而不是脱氧核糖核苷酸。此外，部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列，而且RNA一级结构中没有DNA那样复杂的顺序组织。3.绝大多数RNA为单链分子，单链可自身折迭形成发夹（hairpin）样结构而有局部双螺旋结构的特征，这是各种RAN空间结构的共同特征。RNA局部双螺旋结构中碱基互补配对规律是A对U和G对C。由于RNA分子内部不能较全形成碱基配对，故其碱基克分子比A不等于U，G不等于C，不存在DNA碱基比例的Chargaff规律。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。苏州正规RNA提取试剂厂家
细胞RNA提取的方法：实验提取步骤：标准Trizol提取步骤为液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上，加入Trizol裂解5-10分钟，用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿，上下混匀液体，4度静置10-15分钟。（氯仿为有机溶剂，有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相）。4度离心15分钟，一定注意选择低温离心。离心后分成三层，RNA在上清里，从离心机轻轻拿出EP管，以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下层沉淀，将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇，4度静置10min，然后12000rpm离心10min。苏州RNA提取试剂供应商RNA定量方法与DNA定量相似。
超快速多糖多酚植物RNA提取试剂盒：无DNA污染，可直接反转录，荧光定量，不会出现洗脱液含络合Mg离子成分，压制后续PCR反应的情况。本试剂盒提取的RNA可直接用于对前期RNA提取质量非常高的后续实验，如转录组RNA测序，制作基因芯片，荧光定量PCR，核酸杂交，反转录等所有后续实验。一个样十多分钟搞定！具有多糖多酚植物RNA提取试剂盒已普及到全国各大农业大学，农科院，植物所等相关院校单位，包括中国农业大学，中国农业科学院生物技术所，作物所，蔬菜所，多糖多酚植物RNA提取试剂盒由华越洋自主研发生产，博取众家之长，根据多年来市场反馈不断进行技术升级和改良得来。具有操作步骤少，实验快捷，RNA产量纯度高，充分满足后续实验要求的需要，适用提取样品普遍等特点。产量：每100mg样品提取的RNA平均值在20-50ug不等。纯度：OD值一般在1.9以上。得到的RNA无DNA污染，可直接用于反转录，实时荧光定量PCR（尤其对RNA溶液中DNA非常敏感）等所有后续实验。
目前，主流的RNA提取方法有Trizol法、离心柱法和磁珠法。其中，Trizol法与离心柱法相比，提取效果相当，但因其对操作者带来的毒性，现在越来越被弃用。磁珠法可以针对大批量样本处理，适合机器自动化提取，但是提取核酸纯度低，提取得率低，且使用成本较高。对于拭子RNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室，选择的拭子RNA提取方法应是离心柱法。近来，随着基因诊断技术的发展，从口腔拭子、泌尿生殖道拭子、痰液等样本中进行RNA提取的试剂盒的应用价值越来越大，如tumour早期诊断、遗传病检测和病原体传染核酸检测等。拭子RNA提取效果在很大程度上取决于采样质量、试剂盒性能等，特别是试剂盒的性能较大影响了拭子核酸的基因检测和各种研究的开展。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。
RNA提取试剂的选择：首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用压制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提，可有效防止RNA在提取过程中的降解。苏州正规RNA提取试剂厂家
用于各种植物、动物、微生物的RNA提取，在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。苏州正规RNA提取试剂厂家
石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒（离心柱型）：原理简介：改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，较后低盐的RNasefreewater将纯净RNA（RNA）从硅基质膜上洗脱。试剂盒特点：1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界有名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2、结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。3、独有的MRL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。4、多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高~苏州正规RNA提取试剂厂家
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