[VIP第1年] 指数:3
RNA稳定方法：1.在裂解缓冲液中立即溶解，使RNase失活。然后样品可以立即处理或冷冻保存。2.浸泡在稳定试剂中(如DNA/RNAShield)，使核酸酶失活，并在环境温度下长时间保护核酸。这对正在实地收集样本或处理珍贵的病人样本(例如组织活检、全血等)的研究人员特别有帮助。确保样品完全溶解：在RNA提取过程中，较大限度地提高RNA产量和质量的较佳方法是保证样品的完全裂解。然而，并不是所有的样本都对相同的裂解方案敏感。例如，血细胞(如淋巴细胞、PBMCs等)和微生物细胞往往更难以有效地溶解。光光添加基于洗涤剂的裂解缓冲液可能并不总是足够的。为了提高裂解效果，可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤(研磨珠破碎)匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步骤(如蛋白酶K、溶菌酶等)。RNA提取试剂：TRIpure试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。苏州正规RNA提取试剂生产厂家
血浆/血清中miRNA提取试剂盒：是专门针对血清、血浆样本中miRNA提取而开发的，利用吸附柱法从血清、血浆样品中简单快捷提取高纯度高质量的miRNA。该试剂盒中的裂解液miRBP1及柱结合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜材料，对RNA尤其是smallRNA（<200nt）具有结合能力，与常用的抗凝剂（包括肝素、EDTA、柠檬酸钠、草酸钠）兼容，得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern杂交等后续分子生物学实验操作。普通植物总ＲＮＡ提取试剂盒：采用进口硅基质膜制作的总RNA吸附柱，可以从普通植物的根、茎、叶中快速提取总RNA，30~40分钟内即可完成提取过程，提取的总RNA纯度高，没有DNA和蛋白质的污染，适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot杂交等实验。总RNA吸附柱保证RNA提取速度快，提取效率高。高效去除植物组织中的色素、酚类等杂质，提取RNA的纯度高，产量大。苏州正规RNA提取试剂生产厂家即用型RNA，可在绝大多数下游应用。
细胞RNA提取的方法：实验提取步骤：标准Trizol提取步骤为液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上，加入Trizol裂解5-10分钟，用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿，上下混匀液体，4度静置10-15分钟。（氯仿为有机溶剂，有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相）。4度离心15分钟，一定注意选择低温离心。离心后分成三层，RNA在上清里，从离心机轻轻拿出EP管，以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下层沉淀，将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇，4度静置10min，然后12000rpm离心10min。
piRNA。是一类长度约为24-31nt的非编码小RNA，通过特异性地与PIWI蛋白结合而发挥生物学作用。现已发现其在生殖干细胞分化、胚胎发育、维持基因组完整性、表达遗传学调控、异染色质的形成和物种的性别决定等方面起着重要作用，此外在压制转座子转录和基因转录后调控中也扮演着重要角色，并且越来越多的研究表明在病症组织中piRNA的表达不尽相同。lncRNA。长度约为200-100000个核苷酸，可以通过不同的分子生物学机制调控编码基因的表达，参与疾病相关的信号通路，对疾病的发生、发展及医治有重要作用。研究发现，lncRNA-DANCR明显增强肝病细胞的感性特征，促进一些疾病细胞的形成，在体内干扰DANCR的作用可导致一些疾病细胞活力降低，同时阻止一些miRNA的压制效应，揭发出一个涉及lncRNA、mRNA和miRNA的新一些疾病形成机制。可见，lncRNA对一些疾病方面有重要作用。另外有研究发现lncRNA在宿主抗病菌反应、骨关节炎、囊性纤维化、药物研发等方面也有重要的临床应用价值。以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等，可调节基因表达。
细胞RNA提取的方法：异丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以见到侧壁沉淀，轻轻吸弃上清。向EP管中加入75%酒精洗涤沉淀，帮助分离剩余的有机试剂（剩余有机试剂过多会影响OD值和PCR反应），轻弹沉淀，使其浮在酒精，静置1-2min，让酒精充分接触沉淀，充分溶解有机试剂，然后4度离心5min。轻轻吸弃上清。将EP管再次放于离心机中瞬时离心，弃掉管壁残余液体。然后将EP管置于超净台中干燥5-10min.。注意RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。加入50ulDEPC处理水，震荡充分溶解沉淀。测量RNA浓度。将RNA保存于-80度。很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。苏州正规RNA提取试剂生产厂家
他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度。苏州正规RNA提取试剂生产厂家
总RNA快速提取试剂盒背景资料;EpiQuik™总RNA分离快速试剂盒为从哺乳动物细胞和组织中分离总RNA提供了一种快速、简单和经济有效的方法。洗涤剂用于溶解细胞和灭活核糖核酸酶。特殊的高盐缓冲系统允许蛋白质/DNA被去除，RNA结合到自旋柱的玻璃纤维基质上，同时污染物通过柱。杂质被有效地冲洗掉，纯净的RNA被洗脱。该试剂盒纯化的RNA适用于多种常规应用，包括RT-PCR、cDNA合成、northernblotting、差异显示、引物延伸和mRNA选择。总RNA快速提取试剂盒描述：本试剂盒包含了直接从培养细胞或组织中成功分离RNA所需的所有试剂。经过裂解、结合和洗涤后，使用特殊设计的柱可以很容易地回收高达10个氧化格的RNA。然后，总RNA准备用于各种下游应用。苏州正规RNA提取试剂生产厂家
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