[VIP第1年] 指数:3
RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水，基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题，南京正规RNA提取试剂服务电话。在PBS中加入不同浓度RNase A，高压或不高压，后溶解P-32标记RNA 探针，南京正规RNA提取试剂服务电话。较后数据显示，除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml，否则常规高压过的水，基本检测不出RNase A活性。当然，Thermo的科学家也很谨慎，说这个结论*适用于RNase A，不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材，因为太费劲，而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂，南京正规RNA提取试剂服务电话，我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵，一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂，比如酶、siRNA等，也都会送这样的水。在耗材方面，直接使用大公司的离心管和吸头，根本不用担心核酸酶的问题。为了提高裂解效果，可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤（研磨珠破碎）匹配。南京正规RNA提取试剂服务电话
RNA是核糖核酸，DNA是脱氧核酸。区别：紫外吸收：核酸的λm＝260nm，碱基展开程度越大，紫外吸收就越厉害。当A＝1时，DNA：50ug/ml，RNA和单链DNA：40ug/ml，寡核苷酸：20ug/ml。用A260/A280还可来表示核酸的纯度。沉降速度：对于拓扑异构体（核苷酸数目相同的核酸），其沉降速度从达到小依次为：RNA ; 超螺旋DNA > 解链环状DNA ; 松弛环状DNA ; 线形DNA也就是在离心管中较上层是线形DNA，较下面是RNA。电泳：核苷酸、核酸均可以进行电泳，泳动速度主要由分子大小来决定，因此，电泳是测定核酸分子量的好方法。DNA分子量测定较直接的方法：用适当浓度的EB（溴嘧啶）染色DNA，可以将其他形式的DNA变成线形DNA，用电镜测出其长度，按B-DNA模型算出bp数，根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量。唐山RNA提取试剂生产厂家rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。
RNA指的是核糖核酸。真核生物体的遗传物质存在于细胞核内，多数的真核生物使用DNA也就是脱氧核糖核酸来作为遗传的中心物质，但是少量的病菌遗传物质可以是RNA。正因为病菌的遗传物质是RNA，所以可以通过检测病菌的RNA是否存在，或者其浓度和含量来判断是否存在相应的病菌传染，传染的程度及病菌是否仍在大量复制。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的缩写。存在于生物细胞以及部分病菌、类病菌中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。
RNA提取注意事项：使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒， 如果不是**试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。当前提取效果好的是RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货（国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。在实际RNA提取中，有几个提取原则：保证RNA一级结构的完整性。
经典Trizol法并不能获得总RNA：这个事实可能会刷不少新手甚至老手的三观，但确有实验支持：经典Trizol法会选择性丢失低GC比的miRNA。这一点，源自一则作者自撤稿的故事。V. Narry Kim是韩国鼎鼎大名的美女科学家，专做RNA相关的研究，包括miRNA。几年前她们组发现一个奇怪的“现象”，即贴壁细胞在消化之后，会有一些miRNA的丰度突然降低，看起来好像是被快速“降解”掉了，并据此写了一篇文章发到Molecular Cell上。但很快她们就发现，这个“现象”难以重复：如果用Trizol做实验，就一定是阳性结果，而用试剂盒提RNA，就重复不出来。难道是号称能提总RNA的Trizol方案出了问题？确实如此。经进一步实验后发现，经典的Trizol方案会使得低GC比的miRNA丢失。带口罩、帽子，屏住呼吸、不说话，带乳胶手套并要时常更换。南京正规RNA提取试剂服务电话
DNA/RNA Shield 也会保证取样时微生物基因多样性不会发生改变。南京正规RNA提取试剂服务电话
细胞RNA提取的方法：实验提取步骤：标准Trizol提取步骤为 液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上，加入Trizol裂解5-10分钟，用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿，上下混匀液体，4度静置10-15分钟。（氯仿为有机溶剂，有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相）。4度离心15分钟，一定注意选择低温离心。离心后分成三层，RNA在上清里，从离心机轻轻拿出EP管，以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下层沉淀，将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇，4度静置10min，然后12000rpm离心10min。南京正规RNA提取试剂服务电话
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