黄曲霉b1检测试剂盒试验
步骤将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
1 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2 加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
3 洗涤:小心揭开盖板膜,甩去孔内液体,每孔加350µl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,***一次拍干(用吸水纸拍干,拍干后未被***的气泡可用干净的***头刺破)。
4显色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)。
5终止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
6测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。
黄曲霉b1检测试剂盒样本前处理
浓缩料处理方法
1)称取2g±0.05g粉碎样本于50ml离心管中,加10ml样本提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
2)取2ml上清,加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
3)转移上层液体到另一容器中,下层液留置备用,向上层液中再加入4ml三氯甲烷(或二氯甲烷),充分振荡混5分钟,室温4000转/分离心10分钟;
4)去除上层液体,合并两次的下层液体并充分混匀;
5)取合并后的下层液体2ml于50-60℃氮气或空气下吹干;
6)加入0.5ml样本提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去离子水混匀;
7)取50µl进行分析。
样本稀释倍数:10检测下限:3ppb
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