[VIP第1年] 指数:3
黄曲霉m1检测试剂盒酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
1编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。
3洗涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350µl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，***一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被***的气泡可用干净的***头刺破）。
4显色：每孔加入底物液A50µl，再加底物液B50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。
5终止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。
6测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
产黄曲霉微生物经常在种植、贮藏、加工和运输过程污染玉米、花生等富含脂肪酸的粮食及相关食品和饲料，并会产生多种有毒次生代谢产物，统称为黄曲霉***。黄曲霉***（Aflatoxins，AFT）是一类化学结构相似、具有强毒性的化合物总称。目前已发现的黄曲霉***有20余种，**常见的有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和AFM2，AFB1与AFB2在体内经过羟化可衍生成AFM1、AFM2，其中M是Milk的简写，奶牛食用了含有AFB1和AFB2的饲料，AFB1和AFB2在奶牛体内经过代谢会有一小部分转化为AFM1、AFM2，这也是牛奶中AFM1、AFM2的来源。在天然环境中受污染的粮食和饲料中以AFB1**为多见，其毒性和致*性也**强。1993年，该类物质被国际**研究机构划为I类致*物，其毒性是**的68倍。
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