加样:调整移液器刻度,设定容量值。移液器移取液体试剂和样品血清。吸取液体时,移液器保持竖直状态,将吸头插入液面下2~3mm,用大拇指将移液器顶部按钮按至***停点,然后慢慢松开按钮回原点,接着将按钮按至***停点排出液体稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体后松开按钮。使用多道(如8道或12道)移液器,则可以将移液器的***道对准***个***头,然后倾斜插入,前后方向摇动即可卡紧,避免用重力撞击,吸头卡紧后可看到连接部分形成清晰的密封圈。处理大批量样本时,首孔与末孔加样时间间隔过长会导致各微孔间有不同的起始反应时间,从而影响到测量值的准确性和重复性。为保证不同样品的孵育时间一致,可先取待检样品、FDMVAC阴性血清、FDMVAC阳性血清不低于10μl分别加入96孔板中并做好记录,然后用多道移液器移至FDMVAC抗原包被板相应孔中。也可在抗原包被板直接加样。
间接ELISA是实验室**常用的抗体检测方法之一,间接ELISA应用于各种病毒的检测,其原理是通过利用酶标二抗去辨识一抗来测定抗原量。各类ELISA方法均避免了病毒分离试验的危险性,也避免如PCR试验等无菌环境的限约。前期研究中有对口蹄疫病毒的检测和疫苗的研制的相关实验。有人利用原核表达后纯化建立了间接ELISA方法,为O型口蹄疫诊断试剂及基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。将O型口蹄疫病毒VP1基因在表达载体pET-41b中表达,**终建立了O型口蹄疫病毒的检测方法。
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