黄曲霉素M1检测试剂盒酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
1编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
3洗涤:小心揭开盖板膜,甩去孔内液体,每孔加350ul工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,***一次拍干(用吸水纸拍干,拍干后未被***的气泡可用干净的***头刺破)。
4显色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)。
5终止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
6测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。
黄曲霉***(AFT)主要是由黄曲霉、寄生曲霉等霉菌产生的一类化学结构类似的毒性代谢产物,它们***存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别容易污染花生、玉米、稻米等粮食,是霉菌***中毒性比较大的一类霉菌***。目前,国内外应用较为***、检测准确性较高的黄曲霉***检测方法主要有液相色谱-质谱联用法、液相色谱法、酶联免疫吸附筛查法和薄层色谱法,同时还有胶体金免疫层析法等快检方法。其中以酶联免疫吸附筛查法和胶体金免疫层析法使用**为普遍!
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