[VIP第1年] 指数:3
所需的CY3-NHS酯的量取决于待标记蛋白的量，以及CY3-NHS的比较好摩尔比为10。示例：假设所需的标记蛋白为500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯体积为5.05μL，详细计算过程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.运行偶联反应1)将室温新鲜制备的10mg/mLCY3-NHS酯缓慢加入到0.5mL蛋白质样品中于溶液中，轻轻摇动混匀，然后短暂离心，将样品收集于反应管底部。请勿混匀，否则2)将反应管安置避光处，在接下来的间隔轻轻蛋白水解60分钟。10-15分钟，轻轻翻转几次以充分混合5.偶联偶联物以下方案是使用SepHadexG-25柱封闭染料-偶联偶联物的范例。1)根据制造说明准备SepHadexG-25柱。2)将反应混合物(来自“Runconjugationreaction”)加载到SepHadexG-25柱的顶部。3)一旦样品在顶部树脂表面下方运行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需样品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其应用于荧光探针，细胞染色等。江苏石家庄荧光染料
异硫氰酸荧光素(FITC)是一种有机荧光染料，目前，这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。在495/517nm处，该染料会产生激发/发射峰值，并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合，该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合。而它的基本成分——荧光素，其摩尔质量为332g/mol，常被用作荧光示踪剂。FITC(389g/mol)是用于荧光显微镜技术的首批染料，且其被当成AlexaFluor®488等后续荧光染料的发端。该染料的荧光活性取决于它的大共轭芳香电子系统，而该系统受蓝色光谱中的光所激发。经常与FITC同时使用的另一种染料是与其相似的TRITC[四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸]。与FITC相反，TRITC并非荧光素，而是罗丹明家族的衍生物。罗丹明也具有一个大的共轭芳香电子系统，正是该系统引发了它们的荧光行为。还有一点与FITC相反，TRITC(479g/mol)由比较**长为550nm的绿色光谱中的光所激发，它的比较大发射波长为573nm。与蛋白质（例如，抗体）结合也基于异硫氰酸盐反应基团。上海荧光染料红色小动物成像荧光染料能够选择性地与目标细胞或组织结合。
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写，是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记，对于蛋白抗体的标记，可以通过简单的混合反应来完成结合，下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法，具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果，请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0，应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL，标记效率会**降低。为获得比较好标记效率，建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中，和铵离子，否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。
荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其广泛应用于荧光免疫，荧光探针，细胞染色等。包括特异性的DNA染色，用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂，可作为背景对照，标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、**基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记**常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度，就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量，并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。Super Flour 系列在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。
小动物***荧光成像技术是现***物医学研究领域的一项重要技术，因其具有操作简单、实时直观、灵敏度高、实验成本低等特点，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。纳米材料在生物医学领域得到广泛应用，旨在解决传统医学面临的各种医学挑战，包括生物利用度差，靶向特异性受损，全身和***毒性等。纳米材料具有很多与众不同的优点，比如多功能性、大的负载量、靶向性、血液循环时间长等。纳米材料在生物医学中起着关键作用，可以有效携带成像探针、***剂或生物材料并传递至靶点，如特定的***、组织甚至细胞。光学成像主要包括生物发光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）两种技术。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）标记细胞或ＤＮＡ，其表达产物与莖火虫素类底物反应产生荧光。后者包括多种荧光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有机荧光染料、荧光上转换纳米粒子、量子点等的应用。 CY5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。浙江荧光染料DAPI
D-荧光素钾盐荧光染料。江苏石家庄荧光染料
与花青和罗丹明染料一样，荧光素也是一种有机染料。荧光素的比较大吸收波长为494nm，比较大发射波长为521nm（通常吸收蓝色范围内的光并发射绿色范围内的光），荧光素是一种高荧光物质。即使在非常少量的情况下也可以检测到它，并且在与抗体结合时用于显微镜检查。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。与许多其他荧光染料一样，荧光素价格低廉且易于使用，使其成为生物学研究中很受欢迎的染料之一。与大多数其他染料不同，荧光素在水溶液中是无毒的。因此，它是极少数用作地下水示踪剂的染料之一。江苏石家庄荧光染料
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