[VIP第1年] 指数:3
一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。Super Flour 系列在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。山东脂溶荧光染料
在1990年代***使用的绿色荧光蛋白（从水母维多利亚水母克隆）及其衍生物（例如藻红蓝蛋白、藻胆蛋白和藻红蛋白等）是当今生物学研究中**常用的一些生物荧光团。虽然荧光团可用于在细胞、细菌和各种***中表达质粒，但它们的使用有一些缺点，即它可能很耗时，并且在融合时还能够改变某些细胞蛋白的正常生物学功能。此外，与许多其他荧光团相比，生物荧光团的光稳定性和灵敏度较低。绿色荧光蛋白(GFP)绿色荧光蛋白是当下流行的生物荧光团之一，由238个氨基酸组成，其中三个负责发出可见绿色荧光的结构。在水母本身中，荧光团与水母发光蛋白（一种蛋白质）相互作用，当添加钙时会发出蓝光。通过DNA重组，研究人员可以使用负责产生蛋白质的基因来研究给定的基因和蛋白质。在这里，在将复合物插入细胞之前，该基因与另一个基因（负责产生所需蛋白质的第二个基因）结合。如果细胞产生绿色荧光，研究人员就可以明显看出该细胞能够表达目标基因。GFP由488nm激光线激发，可在510nm处检测。来自荧光团的微弱信号可以使用抗GFP抗体放大。作为生物标记物，绿色荧光蛋白用于以下功能：监测各种生理过程*识别蛋白质定位*检测转基因表达河北显微镜荧光染料Super Flour 系列荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH 4～10）, 更好的抗淬灭性。
选择荧光染料时要考虑那些因素：激发波长处的消光系数应尽可能高：消光系数是衡量可以吸收多少光子的量度。量子产率应该尽可能高：这是吸收光子与发射光子的比率。消光系数和量子产率的乘积就是亮度。荧光染料应该是光稳定的：遗憾的是，比较不同公司染料的光稳定性的研究并不多。光致变色行为：对于STORM实验，您需要一个闪烁的荧光团。但是，对于分子跟踪实验，您***不想要闪烁的荧光团。活/死细胞渗透性。您想要的反应侧基（例如HaloTag、抗体等）。当您使用多个荧光探针时，尤其是当您量化共定位时，请谨慎处理其他颜色通道中的渗色。单独测试所有荧光探针以评估渗透。
Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50µMHoechst33342染料。（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。（3）在37℃培养细胞10～20分钟。（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。（5）用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）荧光染料。
藻红蛋白-藻红蛋白(PE)是一种红色蛋白色素复合物，属于藻胆蛋白家族。它可以在红藻和隐植物中找到，它作为叶绿素色素的附属物。在生物科学中，荧光团可以与蛋白质结合，例如用于抗原检测的抗体等，因为它能够发出明亮的荧光。由于荧光团往往会很快发生光漂白，因此很少在荧光显微镜中使用。它经常用于流式细胞术。※别藻蓝蛋白(APC)-与藻红蛋白一样，别藻蓝蛋白也属于藻胆蛋白家族，是从红藻中分离出来的。在594和633nm的激光线激发下，荧光团的比较大吸光度在650nm处，而荧光发射峰在66nm处。与荧光素偶联物相比，荧光团的灵敏度已显示高5至10倍，并具有许多其他有益特性，包括大斯托克斯位移、高水溶性、长波长发射和耐猝灭。虽然别藻蓝蛋白通常不用于需要光稳定性的应用，但它***用于流式细胞术、ELISA、微阵列等过程以及各种依赖高灵敏度的应用。DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）对活细胞进行多色成像和流式分析。四川苏州荧光染料
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。山东脂溶荧光染料
SuperFluor活化酯（与Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH4～10）,更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等荧光染料。1．标记效率低——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团少于4mol有以下原因：1）缓冲液中含有痕量伯铵成分，与染料反应降低了标记效率。如果蛋白已经溶于含氨基的缓冲液（如Tris或氨基乙酸），标记前用PBS透析。2）蛋白含量较低(≤1mg/mL)会影响标记效率。3）标记步骤中加入碳酸氢钠的作用是将反应混合物的pH升高至～8，因为在弱碱性环境中标记反应的效率比较高。如果蛋白溶液的缓冲范围在低pH，加入重碳酸盐也无法将pH调节至**适水平。要么加大重碳酸盐的量，要么将缓冲液换成PBS，或用0.1M碳酸氢钠透析等。4）研究显示pH升至9.0～9.4，标记效率和标记速度（只需10min）明显改善。5）不同抗体与荧光团的反应速率不同，染料标记后保留的生物活性程度也不同，因此标准步骤也不是总有比较好的标记结果。为增加标记率，可以对同一样品进行再标记，或减少蛋白的量加大染料的量重新标记。有研究者在室温孵育1小时后再4℃孵育过夜，情况有所改善。山东脂溶荧光染料
文章来源地址: http://huagong.chanpin818.com/hxsj/shsj/deta_21718890.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。
