[VIP第1年] 指数:3
罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。罗丹明123***用作检测线粒体膜电位，也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性，此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。罗丹明123的比较大激发波长为507nm，比较大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。
一：工作液配制用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度（1～20µM），充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。【注意】：对于细胞实验，要控制好总体稀释倍数，DMSO在培养液中的浓度不能超过0.1%，以避免DMSO对细胞的影响。
二：荧光显微镜观察1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104～5×105个/mL。2、在载玻片上孵育细胞，用PBS或HBSS洗涤细胞。3、将Rhodamine123工作液加入载玻片并在37℃下孵育30min至1小时。4、去除Rhodamine123溶液并用培养液洗涤细胞（洗涤细胞后如果要固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15～20min，接着用PBS洗涤）。5、荧光显微镜观察细胞。 Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。浙江细胞膜荧光染料
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度**增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜**分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在***成像中用来示踪。河北荧光染料lucSuper Fluor活化酯（与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。
如何选择的染料？
考虑到荧光染料种类繁多，您如何为您的特定应用选择使用哪种染料？以下是您需要考虑的一些因素。※与实验设计的兼容性：虽然它们可能与其他荧光团共享一些光谱相似性，但每种染料都是***的，并且具有不同的功能、激发和发射波长、波段形状和宽度以及光稳定性。为确保成功，请选择与您的实验设计相辅相成的一种。与设备的兼容性：选择与您正在使用的照明源相匹配的染料。在选择合适的荧光仪器时，请考虑仪器的灵敏度、动态范围、稳定性和通量、信噪比和信空白比。为了获得更好的结果，请确保染料的发射曲线与可用的检测方法相匹配。与样品中其他荧光材料的相容性：在双重或三重标记实验中，您选择的染料的发射和激发曲线不应与其他荧光团重叠。由于许多天然存在的细胞成分会以与您选择的染料或探针相同的波长发出荧光，因此您还需要确保可以从背景自发荧光中清楚地识别所选染料产生的信号。
荧光染料在细胞实验中具有广泛的应用1、细胞膜标记：可以使用荧光染料标记细胞膜，以观察和研究细胞膜的动态和结构变化。2、染色体和DNA标记：用荧光染料标记染色体或DNA，可以观察和分析DNA复制、转录、修复等过程3、蛋白质标记：通过荧光染料标记蛋白质，可以研究蛋白质的相互作用、定位和运动等特性。4、细胞器标记：使用特定波长的荧光染料可以标记和可视化细胞中的线粒体、溶酶体等细胞器。5、神经科学应用：荧光染料在神经科学中也有广泛应用，如标记神经元和突触，观察神经信号的传递等。6、基因表达分析：通过荧光染料标记基因表达产物，可以定量分析基因的表达水平和细胞中的分布情况。吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。
三：贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四：结果检测样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。脂溶性荧光染料cy3、cy5、cy7等。浙江深圳荧光染料
Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）荧光染料。浙江细胞膜荧光染料
一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。浙江细胞膜荧光染料
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