[VIP第1年] 指数:3
小动物***成像技术（invivoimagingtechnology）是利用高灵敏度的光学检测仪器直接检测动物***体内的细胞活动和基因行为研究的一类技术，是近年来发展**快的生命科学研究方法，是**直接观察细胞和分子在体内行为的新兴技术，已广泛应用于生命科学研究的各个领域[1]。***动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。生物发光是利用荧光素酶报告基因在***内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。而荧光发光成像技术是将荧光物质或荧光物质标记的小分子物质如基因、细胞也可是小分子药物、抗体、纳米材料等导入到***体内，通过小动物***成像系统的激发光源激发荧光集团到达高能量状态，而后产生波长较激发光长的发射光，然后通过高灵敏度制冷CCD镜头探测到***内的发射光。通过***成像技术可以观测***动物体内**的生长和转移、炎症的发生、特定基因的表达和药物作用效果等生物学过程。D-荧光素钾盐南京星叶生物科技有限公司。湖南大连荧光染料
Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。Cy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右，它的荧光肉眼观察很明亮，并且对pH不敏感，在共聚焦显微镜中可以用532nm（肩峰）或者556nm（顶峰）的激光束激发，在普通荧光显微镜中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的滤片观察，所以在绝大部分荧光仪器上都可以使用。Cy3也是Dil等细胞电位追踪剂的母核，所以它是在生物技术中非常有用的荧光染料。在荧光成像时，Cy3的背景荧光一般认为比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用来标记蛋白，抗体，多肽等，它常见的使用是标记核酸分子（DNA和RNA）。基于荧光图谱的相似性，Cy3可以被TAMRA，TRITC, BODIPY TMR等染料替代，在需要更明亮，更稳定的替代物时，可以考虑使用AF547或者AF555等。江苏荧光染料Alexa fluorDiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在小动物成像中用来示踪。
荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其广泛应用于荧光免疫，荧光探针，细胞染色等。包括特异性的DNA染色，用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂，可作为背景对照，标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、**基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记**常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度，就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量，并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50µMHoechst33342染料。（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。（3）在37℃培养细胞10～20分钟。（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。（5）用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。羰花青染料用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。
如何选择的染料？
考虑到荧光染料种类繁多，您如何为您的特定应用选择使用哪种染料？以下是您需要考虑的一些因素。※与实验设计的兼容性：虽然它们可能与其他荧光团共享一些光谱相似性，但每种染料都是***的，并且具有不同的功能、激发和发射波长、波段形状和宽度以及光稳定性。为确保成功，请选择与您的实验设计相辅相成的一种。与设备的兼容性：选择与您正在使用的照明源相匹配的染料。在选择合适的荧光仪器时，请考虑仪器的灵敏度、动态范围、稳定性和通量、信噪比和信空白比。为了获得更好的结果，请确保染料的发射曲线与可用的检测方法相匹配。与样品中其他荧光材料的相容性：在双重或三重标记实验中，您选择的染料的发射和激发曲线不应与其他荧光团重叠。由于许多天然存在的细胞成分会以与您选择的染料或探针相同的波长发出荧光，因此您还需要确保可以从背景自发荧光中清楚地识别所选染料产生的信号。 南京星叶生物提供多种性价比高的各类活化荧光素，例如Cy系列、Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）等。湖南大连荧光染料
非磺化花青类染料- 该组中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。湖南大连荧光染料
羰花青染料***用作Di来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiI及其类似物是**常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI***用于测定LDL和HDL等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神经元示踪[2]。湖南大连荧光染料
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