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所需仪器：
-86℃超低温冰箱
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
所需试剂：
胎牛血清（FBS）
细胞培养级 DMSO
冻存液：80%FBS+**MSO
无菌 1×PBS pH=7.2
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
异丙醇
所需耗材：
离心管（15ml、50ml）
T-25 细胞培养瓶
一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）
8ml 冻存管
程序降温盒
操作步骤：
将需要那冻存的细胞从 CO2培养箱中取出，在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，
吸弃瓶内的培养基；
向培养内加入无菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培养瓶，旋转震荡培养瓶，使 PBS
能够浸润到培养平面上所都的面积，吸弃 PBS；
重复步骤 2 一次，之后向瓶内加入消化液 1ml，轻微震荡后放入 37℃CO2培养
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低温冻存技巧冷冻凝固的过程中，水分会在0℃~-20℃区间形成不同形状的结晶在细胞冻存时“降温速度、冰晶形成量和细胞渗透压改变程度”是冻存成功与否的重要关键。降温速度慢：冰晶由细胞外开始形成，造成胞外渗透压变小，细胞内水份移动至细胞外造成细胞脱水。降温速度快：水分流动时间短，细胞内外渗透压改变程度小，但大量水分留在细胞内造成大量胞内冰晶形成，使得胞器损坏。这些都可能引起细胞损伤、凋亡或坏死，也可能造成复苏后细胞存活率低、细胞形态改变、细胞功能丧失、基因变异等现象。由此可知，适合的冻存条件为“在增加细胞渗透压稳定性的溶液中，以慢到能减少胞内冰晶形成，但也足够快到能预防细胞脱水的降温速度冻存细胞”。
细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，后再放置到液氮槽中长期保存。
程序降温盒的使用经验（*供参考）：虽然梯度降温的起始点是室温20°左右，但是冻存液里面的DMSO对细胞0性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先预放至4°，等把细胞用冻存液重悬好了放入冻存盒后，立刻转移到-80度冰箱，第二天再转移到液氮。冻存盒中的异丙醇应使用5~7此后更换一次，而且保证液体量不低于250ml刻度线，否则降温效果会受到影响。异丙醇：无色透明具有乙醇气味的可燃性、0液体，熔点是-87.9度。请注意其可燃性!
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本实用新型一种简易细胞冻存盒，包括底座支撑板，冻存盒体和冻存盒盖，底座支撑板的板面上开设有凹槽结构；所述冻存盒体装设底座支撑板上的凹槽内；冻存盒体与冻存盒盖配合安装；冻存盒体的盒体内开设有第二凹槽结构，冻存盒盖的盒盖内开设有第三凹槽结构，第二凹槽和第三凹槽内均设有保温层结构；冻存盒体内配合安装有支撑冻存架；支撑冻存架上开设有若干冻存管孔。其中，冻存盒体和冻存盒盖均为圆柱形结构，冻存盒体的直径尺寸与冻存盒盖的直径尺寸相配合。其中，凹槽结构、第二凹槽结构和第三凹槽结构均为柱形槽结构；凹槽的开口直径尺寸与冻存盒体的外径尺寸相配合；第二凹槽的开口直径尺寸与第三凹槽的开口直径尺寸相配合。其中，保温层结构为棉花材质材料板。其中，支撑冻存架为泡沫材质的架板；支撑冻存架为圆柱型结构架板。与现有的技术相比，本实用新型的有益效果是：本实用新型通过在支撑冻存架上开设若干冻存管孔，并将细胞冻存管放置在冻存管孔内，能保证细胞冻存管存放稳定，使得细胞冻存盒结构简单、使用方便，通过在冻存盒体和冻存盒盖内设有保温层，可以对细胞冻存管起到缓慢降温和保温的效果。杭州科默斯科技有限公司专心专注，敢于创新。苏州梯度冻存盒规格
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在此实施例中，由于支架是固定在盒体上，因此支架无法取出。这样拧开盒盖时，有机溶剂不会漏出，在在盒体外壁安装有与空腔连通的加液管，加液管用来添加有机溶液，而平时拧盖与加液管为连接状态，只有当盒体内的有机溶液不够时才需要拧开(一般都是在冻存细胞前，室温下添加的)，再加上加液管的顶部高度略高于盒体，保证了拧开拧盖时有机溶液不会漏出。
在本实用新型一实施例中，所述加液管5倾斜设置。倾斜设置不占用支架的空间，而且也方便加液。
在本实用新型一实施例中，所述支架为阶梯型，所述支架由2个圆柱体组成，所述盒体为圆柱体，所述支架的上端与盒体内壁连接，所述支架沿圆柱体的径向方向均匀设有多个冷冻管槽21。冷冻管槽用于放置冷冻管。
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