细胞冻存有两种方法:传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存,程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃,后再放置到液氮槽中长期保存。
程序降温盒的使用经验(*供参考):虽然梯度降温的起始点是室温20°左右,但是冻存液里面的DMSO对细胞0性,尤其是室温的时候,沈阳低温冻存盒图片,所以冻存盒和冻存液先预放至4°,等把细胞用冻存液重悬好了放入冻存盒后,立刻转移到-80度冰箱,第二天再转移到液氮。冻存盒中的异丙醇应使用5~7此后更换一次,而且保证液体量不低于250ml刻度线,否则降温效果会受到影响。异丙醇:无色透明具有乙醇气味的可燃性、0液体,沈阳低温冻存盒图片,沈阳低温冻存盒图片,熔点是-87.9度。请注意其可燃性!
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推荐的,所述冻存盒盖连接块与连接卡槽相互咬合连接。
推荐的,所述冻存盒本体为酚醛泡沫材料。
推荐的,所述冻存管摆放架由相同形状大小的摆放架、第二摆放架、第三摆放架和第四摆放架组合而成。
推荐的,所述导向柱的上端面与冻存盒本体的上端面为同一水平面,且导向柱关于冻存盒本体的轴线对称设置有4个。
推荐的,所述分隔板对称设置有2个,且分隔板的两端与分隔板固定卡槽为嵌入式安装结构。
推荐的,所述冻存区、第二冻存区和第三冻存区上的冻存管插孔的孔径大小均不相同。
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请问梯度冻存盒到底怎么使用?两种方法:
是先把冻存盒放在室温,把细胞放在冻存盒,置于-80度?(這样的好处:细胞可以从室温开始缓慢降温)(并且,据说冻存盒的使用本来就是从20度室温开始降)
还是将冻存盒先放在4度降温,再将细胞放进去,放于-80?(這样的好处:常温下冻存液中DMSO对细胞损伤大,从4度开始降温比较好?)用液氮冻存细胞是医学、生物学等研究领域常用的技术,目前国内实验室液氮中存放的冻存盒通常为不透明的盒体,在盒体内设置有多个隔板,形成能插入多个管瓶的空间,能够储藏多个细胞样品。但是现有的细胞冻存盒,保温效果差,在运输过程中冷气快速流失造成细胞的变质,同时冻存管摆放架只可摆放单一结构的冻存试管,功能性弱,并且冻存管摆放架的高度不可调节,无法针对不同高度的冻存试管进行保存。针对上述问题,急需设计一种新型的细胞冻存盒。技术实现要素:本实用新型的目的在于提供一种细胞冻存盒,以解决上述背景技术中提出现有的细胞冻存盒,保温效果差,在运输过程中冷气快速流失造成细胞的变质,同时冻存管摆放架只可摆放单一结构的冻存试管,功能性弱,并且冻存管摆放架的高度不可调节,无法针对不同高度的冻存试管进行保存的问题。
冻存细胞时要缓慢冷冻,细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻时,细胞内外的水分都会很快形成冰晶,冰晶的形成会给细胞带来很大的损伤,即使在有保护剂的条件下,温度过快的下降也会对细胞有一定的损伤,所以要程序降温,以提高细胞的存活。目前人们冻细胞多的还是将要冻存的细胞放四度,负二十度,负八十度,第二天转入液氮这样一个过程,程序复杂,中间过程稍有不慎就会影响冻存效果。技术实现要素:有鉴于现有技术的上述缺点,本实用新型所要解决的技术问题是提供一种程序降温盒,以解决现有技术的不足。为实现上述目的,本实用新型提供了一种程序降温盒,其特征在于:包括降温盒主体、盒盖、冻存管架,所述降温盒主体内壁固定一层保温棉,所述冻存管架装在降温盒主体上部,所述降温盒主体与冻存管架之间有中空层。杭州科默斯科技有限公司和传统的昨天告别,向规范的未来迈进。
所需仪器:
-86℃超低温冰箱
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
所需试剂:
胎牛血清(FBS)
细胞培养级 DMSO
冻存液:80%FBS+**MSO
无菌 1×PBS pH=7.2
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
异丙醇
所需耗材:
离心管(15ml、50ml)
T-25 细胞培养瓶
一次性无菌移液管(2ml、5ml、10ml)
8ml 冻存管
程序降温盒
操作步骤:
将需要那冻存的细胞从 CO2培养箱中取出,在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,
吸弃瓶内的培养基;
向培养内加入无菌 1×PBS 3ml,之后水平放置培养瓶,旋转震荡培养瓶,使 PBS
能够浸润到培养平面上所都的面积,吸弃 PBS;
重复步骤 2 一次,之后向瓶内加入消化液 1ml,轻微震荡后放入 37℃CO2培养
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Biosharp程序降温盒不需要添加任何醇类液体,可在-80℃的冰箱条件下,为细胞提供-1℃每分的降温速率,满足多数细胞冻存的较好条件。该程序降温盒采用高级聚乙烯泡沫材料制成,内含合金内芯,对冻存环境没有影响,不会影响周围其他冻存样品。细胞冻存效果一致且实验重复性好。
特点:
使用方便
无需醇类液体进行冷冻
后续使用成本较低
更好的细胞活力
实验重复性好
使用方法:
1.将需要装有细胞的冻存管放入室温存放的程序降温盒内,盖上降温盒盖。
2.将程序降温盒放入-80℃冰箱,冷冻4小时以上以达到冻存效果。
3.取出程序降温盒,迅速将冻存管移至液氮环境储存或进行其他后续操作。
4.使用后将程序降温盒置于室温环境,待程序降温盒及合金内芯恢复至室温后备用。
注意事项:
1.放入冰箱前请保证金属圈是平躺在盒底的,且盖子是盖住的。
2.放入冰箱后避免与其他物质紧挨,务必保证周围有2.5cm间隙。
3.闲置时请置于干燥与阴凉处,尽量避免60℃以上高温及紫外光线。
4.强烈建议冻存后检查细胞活性后,再终止原始细胞株的培养。 沈阳低温冻存盒图片
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