[VIP第1年] 指数:3
TaqMan探针法：TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量 PCR 技术。它的工作原理是在 PCR 反应体系中存在一对 PCR 引物和一条探针，探针的5′ 端标记有报告基团，3′ 端标记有荧光淬灭基团，探针只与模板特异结合，其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候，报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收，所以仪器搜集不到信号，随着反应的进展，福建临床疾病荧光定量PCR实验技术服务，福建临床疾病荧光定量PCR实验技术服务，福建临床疾病荧光定量PCR实验技术服务，Taq酶遇到探针，利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探针切断，导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收，产生了荧光信号，因此信号的强度就**了模板 DNA 的拷贝数
实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）技术是在PCR技术的基础上发展起来的核酸定量技术，它是通过在PCR反应体系中加入荧光基团，然后利用荧光信号的积累强弱实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知的DNA模板进行定量，实现了PCR从定性到定量的飞跃，为快速准确地分析样本中的各类待检物质提供了崭新的技术工具，现在已被广泛应用于实验室及临床**标志物的检测。Real-Time PCR与传统的PCR技术相比其使用了荧光探针标记特定核酸从而提高了准确性；灵敏度提高故使用较少的样本量，从而减少了样本消耗殆尽的风险，在一小时左右即可出结果，简化了传统PCR方法；全封闭管分析、利用电脑分析软件对PCR扩增产物的实时动态的检测和自动定量，定量动态范围高达五个数量级，且结果重现性较好，这也提高了检测的灵敏度和精密度。
实时荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用
实时荧光定量PCR是通过荧光信号监测目的基因扩增数量的定量PCR技术,具有灵敏度高,检测速度快等优点。实时荧光定量PCR已被应用于乙肝病原微生物、登革热病原微生物、流感病原微生物、水疱口炎病原微生物等病原微生物的快速检测,在病原微生物快速分型、相似病原微生物的鉴别检测、耐药病原微生物突变体检测等临床和公共卫生领域得到广泛应用。狂犬病是危害严重的**共患病,病死率几乎为。实时荧光定量PCR技术已被应用于狂犬病病原微生物和狂犬病相关病原微生物的核酸检测,具有与金标准DFA相当的灵敏度和特异度,同时克服了金标准DFA的某些局限性,如检测速度更快,无需提取脑组织,对唾液、脑脊液等低病原微生物载量样本具有较好的检出效果,具有成为人间狂犬病诊断技术的潜力。灵敏度是传统RT-PCR的200倍以上,交叉污染的风险更低。实时荧光定量PCR也应用于欧洲蝙蝠病原微生物等狂犬病相关病原微生物的检测,可建立多重实时荧光定量PCR在单一检测体系对多种病原微生物进行快速鉴别,对于预防病原微生物性传染病具有重要的公共卫生意义。
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