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    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0免疫组化编辑锁定讨论免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)，黑龙江四色免疫组化实验服务。中文名免疫组化外文名immunocytochemistry应用免疫学基本原理称为免疫组织化学技术目录1基本原理2分类3作用▪标本▪抗体▪常用染色方法4操作步骤▪操作步骤▪化染色步骤5判定分析6意义▪免疫组化镜检▪细胞凋亡检测▪关于掉片7经验总结▪实验为例▪免疫个人感悟免疫组化基本原理编辑抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，黑龙江四色免疫组化实验服务，黑龙江四色免疫组化实验服务，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

    –新载玻片上有油污，要用洗液浸泡12～24h，自来水冲洗后再用蒸馏水清洗；用绸布擦干或烤箱烤干。清洁的载玻片再用粘附剂处理。·常用的粘附剂有：–APES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）–Polv-L-Lysine（多聚赖氨酸）–铬明胶溶液APES(3-aminopropyltriethoxysilane)3-氨丙基三乙氧基硅烷·现用现配。用纯**或甲醇配制2%APES(v/v);·将洗净的玻片浸于此液中20～30秒钟；·取出稍停片刻，再入纯**酮溶液洗去未结合的APES，置通风橱中晾干或60C烤箱烤干。Polv-L-Lysine(多聚赖氨酸)·将清洁玻片浸于100g/ml(10%w/v)的多聚赖氨酸溶液中(去离子水稀释)，37C放置30min，然后60C烤箱烘烤1h或室温过夜干燥。装盒备用。铬明胶溶液·试剂：铬明矾(chromealum)明胶(gelatine)蒸馏水500ml·先将铬明矾溶解于40C少量蒸馏水中，再加入明胶及蒸馏水，可在70C水浴中使明胶溶化，搅拌均匀后，即可使用。如有残渣，可过滤后再用。·用时稍加溶化，切片浸入2～3min，过夜晾干。免疫细胞化学技术冰冻切片·冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接切片。·在切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程。–缩短了制片时间–抗原性不受损失·对稳定性差的抗原。

    我一般初次做一种新抗体，喜欢先用说明书建议的低浓度和高浓度做一次，然后决定是向高还是低方向摸索。一般先决定二抗的浓度（工作液就好办了，直接滴加），重点摸索一抗的**适浓度。注意：免疫反应中存在前带和后带效应，这提示不是浓度越高，阳性率就越高，反之亦然。⑷重要原因排除之后，也不要忽视抗体的质量：原装抗体一般比较稳定，效果较好；而进口分装次之；工作液可能要注意质量问题。3、同时，DAB的孵育时间可能要适当延长，在镜下观察，有时可延长至30min。但一般3-10min比较好，此时背景也较浅。否则，说明抗体浓度不合适。4、***，血清封闭时间也可相应缩短。一般10-30min，但这个时间可以调整，封闭主要是降低切片的总体背景着色。5、此外，细胞通透也不可忽视。许多战友认为石蜡切片一般不需细胞通透，因为切片时可能已经把细胞切开了，但对于胞**白，建议还是通透一下，促进抗体等试剂充分进入参与反应。6、以上原因，都是针对实际中常见原因来进行分析的，前提是排除操作者的操作错误而引起阴性结果，这就需要新手还是要设置阳性对照以排除方法的问题。还有抗体稀释液的pH值过低等其它原因的干扰。总之，要想把免疫组化做好，可能每一个环节都很重要。

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