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广东DNA甲基化荧光定量PCR实验技术服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

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所在地: 上海市
***更新: 2020-01-21 00:28:46
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产品详细说明

荧光信号**扩增阶段:只有在荧光产生进入**期,广东DNA甲基化荧光定量PCR实验技术服务, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,所以在PCR反应处于**期的某一点上来检测PCR产物的量,由此来推断模板**初的含量而进行定量分析。研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,广东DNA甲基化荧光定量PCR实验技术服务,Ct值越小。通过已知起始拷贝数的标准品可得到标准曲线,广东DNA甲基化荧光定量PCR实验技术服务,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数

在平台期,扩增产物已不再呈**级的增加,所以反应终产物量与起始模板量之间已经不存在线性关系,通过反应终产物也算不出起始DNA拷贝数

使用包含 3 种不同浓度的 ROX 染料的预混液对 TGF-β 进行扩增。显示 (A) Ct 值和 (B) 标准差随 ROX 染料浓度的变化。降低 ROX 染料浓度导致 Ct 出现得更早,但是会增大标准差。使用 Applied Biosystems 7500 实时荧光定量 PCR 系统执行所有扩增。

Ct 随 PCR 效率发生变化。蓝色标准曲线的效率为 **(斜率为 –3.3)。绿色标准曲线的效率为 78%(斜率为 –4)。与高效率条件相比(蓝色),在低效率条件下(绿色),扩增量 Y 使 Ct 出现得更早。较低扩增量 (X) 时则情况相反,与高效率条件(蓝色)相比,低效率条件(绿色)使 Ct 出现得更晚。

为了正确地评估 PCR 效率,至少需要 3 次重复和至少 5 个数量级倍数的模板浓度。图 6 说了建议此精确级别的理由,它证明在 1 个数量级倍数与 5 个数量级倍数范围内测试稀释模板时,获得的斜率或效率可能产生数学偏差。因此,即使检测 ** 有效,由于每个稀释点都存在标准差,检测一个数量级倍数的连续稀释时,可能获得 70 至 170% 的范围。在 5 个数量级倍数范围内做相同数量的稀释点或重复,可能的偏移只有 ±8%。这意味着在 5 个数量级倍数范围内,如果效率为 94%,则该实验的效率范围介于 88% 到 ** 之间。为了准确测定 PCR 反应的效率,必须进行 5 个数量级倍数的连续稀释。-3.3 ±10% 的斜率意味着效率达到 ** ±±10%。PCR 反应效率越低,那么灵敏度越低。

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