[VIP第1年] 指数:3
使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，四川多标记免疫组化，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源比较好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。3、免疫组化和免疫荧光结果分析：见***场试验讲座。案例一DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的SP三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，***批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（SantaCruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时抗体稀释液也不够了，四川多标记免疫组化，我又重新从博士德公司买了一小瓶10ml。从第二批实验开始，组化实验结果一直显示强背景着色，四川多标记免疫组化，特异性染色很难辨别。后来我将标本拿到上海舜田生物去做，做了效果很不错，于是我就请教了他们公司从事病理30多年经验的老师，她告诉我应该如何去分析和解决问题，很快我就找到了思路，结果问题终于解决了。
·免疫动物时，将弗氏佐剂与抗原按体积1:1混合乳化后(油包水)注入动物。–一般***注射时用完全佐剂乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。佐剂与抗原乳化的方法·研磨法：适于制备大量的佐剂抗原–先将不完全佐剂加热，取；缓缓滴入，边滴边按同一方向研磨，使菌体完全分散。–按同样方法滴人抗原，每加一滴应研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人后，应成为乳白色粘稠的油包水乳剂。·缺点：研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大，对微量或难得抗原不宜采用。佐剂与抗原乳化的方法(续)·注射器混合法–将等量的完全佐剂和抗原分别吸人两个5ml注射器内，然后插入三通管内，交替推动针管混匀，往复操作直至形成粘稠的乳剂为止。·优点：无菌操作，节省抗原或佐剂。·缺点：不易乳化，时间长。佐剂与抗原乳化的方法(续)·快速乳化法：利用超声波粉碎器可快速乳化抗原和佐剂混合物。–将抗原和佐剂按所需量加入一离心管中，置于超声波粉碎器上，粉碎头浸入液面下，离瓶底，以免打碎离心管。–每次乳化10～15s，然后置冰箱lmin左右。反复乳化3～4次即可完全乳化。管内残余量800r/min离心5～10min收集。·优点：简单、快速、节省材料。
其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中优先的组织标本制作方法。免疫组化抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。免疫组化常用染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法**常用。免疫组化操作步骤编辑一免疫组化（SP法）操作步骤1．切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行2.缓冲液洗3min/2次。3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分钟。4.缓冲液洗5min/2次。5.滴加UltraVBlock。
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