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新疆MiRNA 荧光定量PCR课题承包 欢迎咨询 上海朝瑞生物科技供应

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所在地: 上海市
最后更新: 2020-01-21 05:20:53
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SNP基因分型技术原理是PCR扩增含有SNP的基因组片段,主要特点是准确性高、灵活性强、通量大,新疆MiRNA 荧光定量PCR课题承包,主要方法是TaqMan探针法。TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,新疆MiRNA 荧光定量PCR课题承包,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,新疆MiRNA 荧光定量PCR课题承包,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。

新疆MiRNA 荧光定量PCR课题承包

TaqMan探针法:TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量 PCR 技术。它的工作原理是在 PCR 反应体系中存在一对 PCR 引物和一条探针,探针的5′ 端标记有报告基团,3′ 端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,随着反应的进展,Taq酶遇到探针,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就代表了模板 DNA 的拷贝数

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纯度检测

  RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度,比值范围1.8到2.1。

  变性琼脂糖凝胶电泳测定

  制胶

  1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

  灌制凝胶板,预留加样孔至少可以加入25 μl溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

  准备RNA样品

  取3μgRNA,加3倍体积的甲醛上样染液,加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10μg/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。

  电泳

  上样前凝胶须预电泳5min,随后将样品加入上样孔。5–6V/cm电压下2h,电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2–3cm。

  紫外透射光下观察并拍照

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文章来源地址: http://huagong.chanpin818.com/wujiyan/deta_3129644.html

 
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