云南基因突变荧光定量PCR分析服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）指的是在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力（即实时）。因此，数据可在PCR扩增过程中，而非PCR结束之后，进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了**性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中，反应以循环中***检测到目标扩增的时间点为特征，而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量，云南基因突变荧光定量PCR分析服务，云南基因突变荧光定量PCR分析服务。目标核酸的起始拷贝数越高，云南基因突变荧光定量PCR分析服务，则会越快观察到荧光的***增加。相反，终点法检测（也称 “读板检测”）测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。

荧光信号**扩增阶段：只有在荧光产生进入**期， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，所以在PCR反应处于**期的某一点上来检测PCR产物的量，由此来推断模板**初的含量而进行定量分析。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。通过已知起始拷贝数的标准品可得到标准曲线，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数

在平台期，扩增产物已不再呈**级的增加，所以反应终产物量与起始模板量之间已经不存在线性关系，通过反应终产物也算不出起始DNA拷贝数

浓度测定

  A260下读值为1表示40 μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 μg/ml。具体计算如下：

  RNA溶于40 μl DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495μl的TE中，测得A260 = 0.21

  RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或 0.84 μg/μl

  取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 μl，剩余RNA总量为：

  35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg

  RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。

  2)变性琼脂糖凝胶电泳测定

文章来源地址: http://huagong.chanpin818.com/wujiyan/deta_3129645.html

免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。