[VIP第1年] 指数:3
在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。3）免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。5、被检测的物质组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂，上海七色免疫组化、受体、酶、***、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。6、特点1）特异性强免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，上海七色免疫组化，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，上海七色免疫组化，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高在应用免疫组化的起始阶段。
形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，***用底物显色剂显色。酶标抗体间接法的操作步骤·标本准备：–石蜡脱蜡至水；–冰冻切片浸入4C**固定10min，PBST漂洗，5min×3；–细胞爬片先用PBS洗，然后4C**固定10min，再PBST漂洗，5min×3；·石蜡切片需要进行抗原修复，其它标本则不用；(2)酶标抗体间接法的操作步骤(续)·封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2-甲醇溶液室温孵育5～10min(湿盒内)；·PBST漂洗，5min×3；·5～10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭，室温孵育30min(湿盒内)；·倾去血清勿洗，加1%BSA(PBST配制)稀释的一抗，37C孵育60min或4C过夜(湿盒内)；(2)酶标抗体间接法的操作步骤(续)·PBST漂洗，5min×3；·加HRP标记的二抗室温孵育lh或37C30min；·加(显色液应新鲜配置)；·经PBS漂洗3次后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，明胶甘油封片，显微镜观察。(2)非标记抗体酶法——酶桥法·首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体；·以二抗作桥，将抗酶抗体联结在一抗上；·再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的分布–优点：任何抗体均未被酶标记。酶是通过免疫学原理与酶抗体结合的。
6、看来主要祸根是抗体稀释液的pH值出问题了，于是我又用PBS替代抗体稀释液和新试剂盒内的试剂对组织切片做了免疫组化，结果还是没有做出来：背景很深。这真把我搞惨了。难道还有什么原因吗？通过仔细分析：一抗一定是结合上去了（老SP试剂盒结果很好），问题是二抗没有结合上去也不对（因为***背景很深，这说明二抗可能也结合上去了），DAB孵育时间现在只用1、5min也是背景深而特异性染色浅，那我又怀疑封闭血清了。7、我做了两张切片：一张用老试剂盒内还剩下一点的血清而另一张用新试剂盒内的封闭血清，其余试剂（二抗、SP）均用新试剂盒提供的，结果是前一张效果很好，而后一张能够看到特异性染色，但背景太深，拍照效果不佳。看来封闭血清也是罪会祸首之一。结果分析显示：抗体稀释液的PH值偏低和封闭血清的失效导致了我的免疫组化结果的不佳，望大家在以后的组化实验中也要注意这两个不太引人注意的关键问题。惨痛的教训，值得引以为鉴。案例二DAB染色后切片着色呈阴性结果背景：其实免疫组化在DAB染色后一般有四种情况：阳性染色效果很好、阴性染色、非特异性染色很深、阴阳脸（染色不均匀）。而阴性染色是许多初学者经常遇到的头疼问题。
文章来源地址: http://huagong.chanpin818.com/wujiyan/deta_3180112.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。
